中国有多少省,八十年代中国有多少个省?
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ti质粒,用ti质粒作为运载体的原因?
一般载体所具备的基本条件为:
1、能自我复制,并具有一定的拷贝数;
2、带有抗性基因,便于筛选和鉴定;
3、在适当的位置有单酶切位点;
4、带有强启动子,驱动目的基因在宿主细胞内高效表达。
Ti质粒是诱导植物肿瘤的质粒,其结果中的可转移DNA(T-DNA)顺序有促进Ti质粒转移至植物细胞染色体DNA(cDNA)中的作用。T-DNA由20kb组成,可随机整合至植物细胞cDNA中。Ti质粒为环状双螺旋DNA,由185kb组成。
T-DNA又名三螺旋DNA,是一种由三股ssDNA旋转螺旋形成的一种特殊脱氧核糖核苷酸结构。
T-DNA是Ti质粒上的一个片断。
T-DNA上有三套基因和左右两个边界,其中两套基因分别控制合成植物生长素与分裂素,促使植物创伤组织无限制地生长与分裂,形成冠瘿瘤,第三套基因合成冠瘿碱,冠瘿碱有四种类型:章鱼碱、胭脂碱、农杆碱、琥珀碱,是农杆菌生长必需的物质。
构建重组质粒时,常用Ti质粒作为载体,是因为Ti质粒上具有T-DNA,它能把目的基因整合到受体细胞的染色体的DNA上.
Ti是在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种核区DNA外的自主复制的环形双链DNA分子。是英文肿瘤诱发(tumor-inducing)的缩略式。
A、在目的基因的左侧只有B酶的识别位点,右侧只有C酶的识别位点,因此应该使用酶B和酶C切取抗虫基因,A正确;
B、应该将目的基因插入T-DNA,而T-DNA中含有A酶和B酶的切割位点,因此应该使用酶A和酶B切割Ti质粒,B正确;
C、酶A和酶C切割形成的黏性末端相同,使用酶B和酶C切取抗虫基因,使用酶A和酶B切割Ti质粒,再用DNA连接酶连接两者形成重组质粒后,重组质粒不含酶A的识别位点,C错误;
D、成功建构的重组质粒含有两个酶C的识别位点,因此用酶C处理重组质粒将得到2个DNA片段,D正确.
故选:C.
Ti质粒是一种 DNA病毒,侵染根瘤菌,打到基因重组的目的
基因克隆载体必须具备三个条件,具有能使外源DNA片段插入的克隆位点;能携带外源DNA进入受体细胞,或游离在细胞质中进行自我复制,或整合到染色体DNA上随染色体DNA的复制而复制;必须具有选择标记,以便筛选承载外源DNA的受体细胞。
目前原核受体细胞的载体主要有细菌质粒(松弛型)和λ噬菌体两类,真核细胞受体的载体主要有SV40病毒(用于动物转化)和Ti质粒(用于植物转化)。
载体是农杆菌中特有的Ti-质粒,受体细胞是大多数的双子叶植物细胞和裸子植物细胞
农杆菌侵染植物首先是吸附于植物表面伤口,受伤植物分泌的酚类小分子化合物可以诱导Vir基因的表达。Vir产物能诱导Ti质粒产生一条新的T-DNA单链分子。此单链分子从Ti质粒上脱离后,可以与Vir产物VIRD 2 蛋白共价结合,并在VIRD 4和VIRB等蛋白的帮助下从农杆菌进入植物细胞的染色体中。
1.组成型启动子(constitutive promoter)是指在该类启动子控制下,结构基因的表达大体恒定在一定水平上,在不同组织、部位表达水平没有明显差异。目前使用最广泛的组成型启动子是花椰菜花叶病毒(CaMV)35S 启动子、来自根癌农杆菌Ti 质粒T-DNA 区域的胭脂碱合成酶基因Ocs 启动子,后者虽来自细菌,但具有植物启动子的特性。
2.组织特异启动子(tissue-specific promoter)又称器官特异性启动子。在这类启动子调控下,基因往往只在某些特定的器官或组织部位表达,并表现出发育调节的特性。例如烟草的花粉绒毡层细胞中特异表达基因启动子TA29,豌豆的豆清蛋白(leguimin)基因启动子可在转化植物种子中特异性表达,马铃薯块茎储藏蛋白(patatin)基因启动子在块茎中优势表达。
3.诱导型启动子(inducible promoter)是指在某些特定的物理或化学信号的刺激下,该种类型的启动子可以大幅度地提高基因的转录水平。目前已经分离了光诱导表达基因启动子、热诱导表达基因启动子、创伤诱导表达基因启动子、真菌诱导表达基因启动子和共生细菌诱导表达基因启动子等。
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